做好保護工作,延長(cháng)Thermo色譜柱的使用壽命
更新時(shí)間:2019-03-01 點(diǎn)擊次數:1246次
無(wú)論氣相還是液相,Thermo色譜柱都是分離的核心。色譜柱使用的好壞,直接關(guān)系到分析分離的結果。每根柱子每?jì)蓚€(gè)月保養一次,特別是對于一些使用頻率少的柱子,因為放置時(shí)間長(cháng),容易干柱,每一次做好保養記錄。對于確已失效的柱子,做好停用記錄,不能隨意丟棄,專(zhuān)門(mén)存放,如果現用的柱子的填料需要填補,可以用存放的柱子的填料。在從事生產(chǎn)的單位的質(zhì)檢部門(mén),對于使用時(shí)間較長(cháng)柱效降低的柱子,可把它用于檢測產(chǎn)品的中間體。
Thermo色譜柱使用一段時(shí)間后,常遇到柱子被污染,柱效會(huì )有一定程度的下降,采用適當的方法對色譜柱進(jìn)行保護,可以延長(cháng)Thermo色譜柱的使用壽命。
樣品和流動(dòng)相的處理:溶解的樣品進(jìn)樣前用濾膜過(guò)濾以除去不溶物。如果必要,需進(jìn)行樣品的預處理。流動(dòng)相中如有不純物質(zhì)將影響柱效,所以溶劑盡量使用色譜級別的,至少是分析純級別,流動(dòng)相使用前用微孔薄膜過(guò)濾。在流動(dòng)相的輸液管前安裝過(guò)濾器,過(guò)濾器定期用甲醇超聲清洗,如果效果不好,可用10%的稀硝酸浸泡清洗。對于堵塞嚴重的過(guò)濾器,可在火焰上灼燒后再清洗。
保護柱(預柱)的使用:對于較昂貴的色譜柱,可以在柱前加一保護柱,防止樣品中雜質(zhì)污染分析柱,對于制備柱,因其進(jìn)樣量大,使用保護柱尤為重要。
常規處理:硅膠、氧化鋁、極性鍵合相色譜柱每一次用完后用低流速長(cháng)時(shí)間的二氯甲烷或正己烷等溶劑沖洗。鍵合相硅膠色譜柱、離子交換色譜柱和凝膠色譜柱先用蒸餾水沖洗,再用甲醇沖洗,然后用甲醇與蒸餾水以一定比例混合的溶液沖洗后過(guò)夜。
對于已使用一段時(shí)間后柱效下降的色譜柱可按以下方法進(jìn)行再生:再生處理包括活化(右→左)和凈化(左→右)兩種。硅膠、氧化鋁、極性鍵合相色譜柱按下列順序沖洗:*基戊烷或己烷←→三氯乙烷←→乙酸乙脂←→丙酮←→乙醇←→水。鍵合相硅膠柱:蒸餾水←→甲醇(沖洗過(guò)程中可加入少量二甲基甲酰胺)。離子交換樹(shù)脂柱:高濃度的NaCl溶液(1-2molL的NaCl溶液)可使大部分樹(shù)脂再生,油脂等少數與樹(shù)脂緊密結合的物質(zhì)可用低濃度堿溶液(如0.1molL的NaOH溶液)沖洗,酸性有機物吸附在固定相的用低pH緩沖液沖洗,堿性有機物用高pH緩沖液沖洗,然后再用蒸餾水←→甲醇←→二氯甲烷←→甲醇←→蒸餾水沖洗。
凝膠色譜柱:由于凝膠色譜柱是根據被分離物質(zhì)的分子量大小而分離物質(zhì),通常用稀的氫氧化鈉或非離子型去垢劑(0.2%-1%NP-40或Lubrol)沖洗可除去大部分的結合物質(zhì),如果一些污染物仍然不能清除時(shí),用24%或30%乙腈沖洗過(guò)夜可除去疏水蛋白,用30%-50%乙酸可除去親水蛋白,用蛋白水解酶處理可分解凝膠中剩余的痕量胃蛋白酶,然后再用蒸餾水←→甲醇←→蒸餾水沖洗。
已污染的色譜柱的處理:因保留強的物質(zhì)污染,流動(dòng)相或樣品中不溶物沉積于柱頭,可用下列方法洗滌:去除脂類(lèi)可用si氫呋喃、乙腈或甲醇洗滌;去除蛋白質(zhì)可用乙腈、丙醇和1%三lv乙酸進(jìn)行梯度洗脫;一些高疏水性化合物可用乙腈或甲醇洗脫,同時(shí)反復注入100-200ml的si氫呋喃。
柱頭處理:對于柱頭堵塞污染嚴重的情況而且用溶劑沖洗無(wú)效的色譜柱,只有打開(kāi)柱子去除柱頂的填料重裝:先拆下不銹鋼燒結過(guò)濾器,檢查柱床,常見(jiàn)凹陷或受污染的帶色填料,剔去不規則床層和帶色填料,使柱床顯白色并*水平,再用甲醇作糊狀填料勻漿液,將糊狀填料勻漿液滴在柱上靠重力從勻漿液中排出甲醇液,重復直到填料水平。
柱子的貯存:首先柱子必須清洗干凈后才能貯存,柱子不能貯存在水或水性溶劑中,否則會(huì )引起微生物的滋生。極性色譜柱可用適當溶劑如二氯甲烷沖洗;鍵合相色譜柱用甲醇沖洗;陰離子交換色譜柱用0.002%洗必泰(雙氯苯雙胍己烷)的緩沖液沖洗;陽(yáng)離子交換色譜柱用0.005%硫柳汞緩沖液沖洗;凝膠色譜柱用緩沖液中加0.02%疊dan化鈉或用20%乙醇沖洗。再將柱子兩頭密封,以防止溶劑蒸發(fā)使柱子干燥而引起柱子結構的幾何學(xué)改變。